Monkeypox Viris an tan reyèl PCR Twous

1. EgzanpKoleksyon:Yo ta dwe kolekte echantiyon an nan tib esteril an akò

ak espesifikasyon teknik estanda.

2. Preparasyon reyaktif (Zòn Preparasyon reyaktif)

Retire eleman yo nan twous la, balanse yo nan tanperati chanm pou itilize sibstiti.

3. Pwosesis Espesimèn (Zòn Pwosesis Espesimèn)

3.1 Ekstraksyon asid nikleik

Li rekòmande pou pran echantiyon likid 200μL, Kontwòl Pozitif ak Kontwòl Negatif pou fè ekstraksyon asid nikleyik, dapre kondisyon ki koresponn ak pwosedi nan twous ekstraksyon ADN viral.

3.2 Poud lyofilize dissolve ak adisyon modèl

Prepare Monkeypox Viris Lyophilized premix selon kantite echantiyon yo genyen.Yon echantiyon bezwen yon tib PCR ki gen poud lyofilize premix.Kontwòl negatif ak kontwòl pozitif yo ta dwe trete kòm de echantiyon.

(1) Ajoute 15μL Solisyon Dissolvant nan chak tib PCR ki gen Lyophilized premix, Lè sa a, ajoute 5μL echantiyon ekstrè / Kontwòl Negatif / Kontwòl Pozitif nan chak tib PCR respektivman.

(2) Kouvri tib PCR byen sere, repwoche tib PCR alamen jiskaske poud lyofilize konplètman fonn ak melanje, kolekte likid la nan pati anba tib PCR pa santrifujasyon enstantane a ba vitès.

(3) Si sèvi ak yon enstriman PCR an tan reyèl pou deteksyon, lè sa a dirèkteman transfere tib PCR nan zòn anplifikasyon an;si sèvi ak BTK-8 pou deteksyon, Lè sa a, bezwen fè operasyon sa yo: transfere 10 μL likid soti nan tib PCR nan chip reyaksyon an byen nan BTK-8.Yon tib PCR koresponn ak yon sèl byen sou chip la.Pandan operasyon pipèt, asire ke pipèt la se 90 degre vètikal.Konsèy pipèt baryè aerosol yo ta dwe mete nan sant la nan pi a ak fòs modere epi sispann pouse pipèt la lè li rive nan premye angrenaj la (pou evite bul).Apre pwi yo ranpli, pran yon manbràn chip reyaksyon pou kouvri tout pwi yo epi yo transfere chip la nan zòn deteksyon anplifikasyon an.

4. Anplifikasyon PCR (Zòn Deteksyon)

4.1 Mete tib PCR / chip reyaksyon yo nan tank reyaksyon an epi mete non chak reyaksyon byen nan lòd ki koresponn lan.

4.2 Anviwònman fliyoresans deteksyon: (1) Monkeypox virus (FAM);(2) Kontwòl Entèn (CY5).

4.3 Kouri pwotokòl monte bisiklèt sa a

Pwotokòl ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

 Pwotokòl BTK-8:

5. Analiz rezilta (tanpri al gade Manyèl Itilizatè Enstriman an)

Apre reyaksyon an, rezilta yo pral sove otomatikman.Klike "Analize" pou analize, epi enstriman an pral otomatikman entèprete valè Ct nan chak echantiyon nan kolòn rezilta.Rezilta kontwòl negatif ak pozitif yo dwe konfòme ak "6. Kontwòl Kalite" sa ki annapre yo.

6. Kontwol kalite

6.1 Kontwòl negatif: Pa gen Ct oswa Ct> 40 nan chanèl FAM, Ct≤40 nan chanèl CY5 ak koub anplifikasyon nòmal.

6.2 Kontwòl pozitif: Ct≤35 nan chanèl FAM ak koub anplifikasyon nòmal, Ct≤40 nan chanèl CY5 ak koub anplifikasyon nòmal.

6.3 Rezilta a valab si tout kritè ki anwo yo satisfè.Sinon, rezilta a pa valab.

Entèpretasyon rezilta

Rezilta sa yo posib:

REMAK: Si rezilta envalid rive, echantiyon an dwe kolekte epi teste ankò.